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                  專注口腔樣本采集技術應用開發的高新技術企業,集高保真無創即時檢測產品(NI-POCT)研發、生產、銷售于一體,授權發明專利十余項

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                  廣州博江生物科技有限公司,成立于2019年5月,專注于疾病無創快速檢測,集口腔樣本采集技術和POCT及分子水平檢測產品的研發、生產、銷售于一體,申請專利16項。

                  公司產品主要包括:核酸提取儀、熒光定量PCR儀、核酸提取試劑盒及各種動物疫病的獸用熒光定量PCR核酸檢測試劑盒,用于臨床病原學檢測與診斷。

                  獸用熒光PCR產品包括家禽(雞、鴨、鵝)、家畜(豬、牛、羊)、水產(魚、蝦)、寵物(貓、狗)等各種動物的100多種常見疾病檢測項目。目前非瘟嚴峻形勢下,以豬群的疾病檢測為主,公司相應地開發了分別以血液、唾液、環境等專用樣本的核酸提取試劑盒。

                  博江生物首席科學家,樊福好博士,世界著名養豬及豬病專家,連續多年在世界豬病大會、李曼大會、國際獸醫診斷大會分享豬病防控經驗。在非洲豬瘟防控方面,提出了唾液學檢測、飼料熟化、定點清除(拔牙)、窗口期檢測、營養冗余等概念,被行業稱為“中國養豬業唾液學之父”和“非洲豬瘟拔牙之父”。

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                  核酸檢測類產品問答

                  核酸檢測類產品

                   

                  1.目前“牧康靈”檢測相關產品有哪幾大類?

                  答:目前我們有三大類檢測產品:一是核酸類產品,包括熒光定量PCR檢測配套產品;二是病毒抗原(蛋白)類檢測產品,包括常見豬病的膠體金抗原快速檢測卡;三是豬健康體檢類產品,包括豬的寒度檢測試劑盒、朊度檢測試劑盒和活度檢測試劑盒等。

                   

                  2.牧康靈核酸檢測類產品的優勢?

                  答:核酸檢測包括核酸提取和PCR反應兩個步驟,所以包括兩種試劑盒。

                  其中核酸提取試劑盒我們更專業,特別是針對非洲豬瘟病毒檢測,養殖場對于臨床唾液樣本采集和環境監測的特殊要求,我們開發了高效準確的唾液樣本核酸提取試劑盒和環境樣本核酸提取試劑盒,通過實驗對比驗證,這兩種提取盒的效率是普通試劑盒提取量的10倍以上。

                  其次是熒光定量PCR檢測試劑盒,通過實驗室對比檢測,我們PCR試劑盒的靈敏度不僅檢測血液樣本靈敏度是100%,而且檢測唾液和環境樣本靈敏度也高達100%,對于豬場精準檢測,精準清除具有更好的指導意義。

                   

                  3.非瘟檢測豬唾液樣本為何要用唾液專用核酸提取盒,普通提取試劑盒不能提取嗎?

                  中國動物疫病預防控制中心發布的第二批非洲豬瘟現場快速檢測試劑名單,包括26個企業的34個產品。但是實驗室測評和篩選產品時,檢測樣品類型僅限于豬血液和豬組織樣品。但是豬場在非瘟形勢下想存活下來,要靠早期監測生物安全防控效果,用的樣本大多是豬的唾液和環境物質,非瘟病毒含量低,并且不同樣本的核酸含量、酶含量、特殊雜質含量都不一樣。所以說,目前不配套核酸提取試劑盒,僅含有核酸提取液的非洲豬瘟病毒熒光PCR快速檢測試劑盒或提取效率低的核酸提取試劑盒并不能滿足豬場的臨床檢測需求。

                  4.唾液樣本有何特殊性?

                  答:首先,唾液樣本中含有豐富的酶類物質:有溶菌酶、唾液淀粉酶、過氧化物酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、丙酮酸激酶、谷胱甘肽還原酶等,大量酶類物質會對病毒的核酸有一定的降解作用。其次,唾液樣本病毒含量本身較低,提取效率不高的試劑盒直接影響檢出率。

                   

                  5.唾液樣本核酸提取盒專門用于提取唾液,那血液或其他樣本可以提取嗎?

                  答:唾液樣本核酸提取試劑盒適用于從唾液樣本中提取基因組DNA。試劑盒采用獨特的裂解液和緩沖液系統,配合高效吸附DNA的吸附膜,在一定條件下對唾液中含量不多的DNA具有極強的吸附富集能力,當條件改變時又可以可逆地釋放DNA,從而達到快速分離純化DNA、并最大限度地去除蛋白質等雜質的目的,從而保證提取核酸的純度。

                  其他血液和拭子樣本也可以用該試劑盒提取,但相對而言,該試劑盒更適用于唾液樣本。

                  血液樣本可用普通核酸提取試劑盒即可,其他簡單的拭子樣本也可用該試劑盒提取,但若是樣本類型復雜、含雜質較多,建議用環境樣本核酸提取試劑盒高效提取。

                   

                  6、針對唾液樣本中非洲豬瘟病毒的檢測,怎樣檢測更靈敏?

                  答:首先唾液樣本檢測要用專門的唾液樣本核酸提取試劑盒來提取病毒核酸,這樣能更精確的抓住唾液樣本中少量的病毒核酸,便于下一步擴增檢測。其次,PCR檢測要選用高度靈敏的反應試劑盒,普通檢測血液樣本的PCR試劑盒還不能滿足唾液樣本中低濃度核酸的檢出。所以兩種試劑盒是配套,是檢出唾液樣本中非洲豬瘟病毒的關鍵。

                   

                  7.環境樣本核酸提取試劑盒主要針對什么類型的樣本?

                  答:環境樣本核酸提取試劑盒是專為環境樣本DNA提取而設計的,適合從各種環境如豬場土壤、底泥、漏縫地板以及各種動物糞便、尿液,豬舍內外地面、墻面,運輸車輛各部位和人員頭發、衣物等處采集樣本,采用棉拭子蘸取足量此類樣品,從中提取高產量、高純度的核酸DNA。

                   

                  8.環境樣本核酸提取試劑盒效果與普通核酸提取步驟有何不同?

                  產品試劑組成除了有傳統的裂解液、洗液和洗脫液,還針對環境樣本的復雜性和特殊性,增加了干珠管、S2增強裂解液、S3-腐殖酸吸附劑和S4-結合液,其中干珠管可以更好的分散樣本,讓樣本與裂解液充分接觸和裂解,S3吸附劑可選擇性吸附DNA樣品中的腐殖酸等抑制因子,提高DNA純度,檢出效率更高。增加了試劑從而增加了處理步驟,但最終提取的核酸效率是普通提取盒的10-100倍。

                   

                  9.唾液和環境樣本核酸提取試劑盒的洗液在使用前都要加相應體積的無水乙醇嗎?

                  答:是的。每個新提取盒第一次使用前,在兩種洗液里面都要按說明書加入相應體積的無水乙醇才能使用。無水乙醇屬于易燃易爆化學試劑,所以不能直接放在試劑盒里運輸,需要使用單位自行購買準備。如果不能購買到實驗室用的無水乙醇,可用醫用的95%酒精代替,但注意不要購買還其他復方成分的95%酒精,一定是單一成分的酒精。

                   

                  10.非洲豬瘟病毒檢測有哪些檢測產品可供選擇?

                  答:目前非洲豬瘟檢測有膠體金快速檢測卡和熒光定量PCR檢測試劑盒兩種。

                  膠體金快速檢測卡優點是操作簡單,檢測快速,缺點是準確度只有60-70%,且僅適用于發病豬的血液樣本檢測。

                  豬場早期監控和生物安全防控檢測都需要用靈敏度高的熒光定量PCR檢測試劑盒,樣本最好是無創采集豬唾液樣本進行檢測。

                  除了PCR反應盒要選擇高度靈敏的檢測試劑盒,核酸提取步驟也要用唾液和環境樣本專用核酸提取試劑盒。這樣全面配套,才能保證檢測結果的準確性,發揮豬場早期檢測的精準監控作用。

                   

                  11.PCR檢測對基層豬場的實驗環境條件有何要求?

                  答:基層豬場PCR實驗室按照專業PCR檢測實驗室標準來建設成本太高,可通過劃分區域,通風換氣和消毒清潔等方法來保障實驗室檢測工作的正常運行。

                  建議豬場檢測實驗室至少分三個區域:一是樣本處理區,用來做樣本前處理和核酸提??;二是試劑配制區,用來配制和分裝PCR反應液,添加核酸模板等;三是PCR 擴增區,用來上機檢測,觀測結果。各工作區要有一定的物理隔離,如隔板、房間、超凈工作臺等。各區的移液槍、吸頭、離心管等實驗用品要專區專用,不能交叉混用。實驗人員進入不同區域操作時最好更換衣服和手套,防止交叉污染。

                   

                  12. PCR實驗室各區功能及主要設備有哪些?

                  答:樣品制備區:主要進行樣品的收集、保存和核酸提取,本區主要設備有冰箱,離心機,水浴鍋、渦旋振蕩器、移液槍等。試劑耗材包括核酸提取試劑盒、采樣棉簽、唾液采集包、5ml、1.5/2ml離心管、1.5ml離心管架、大中小號槍頭、生理鹽水、無水乙醇或者95%酒精、一次性手套、口罩等。

                  試劑配制區主要進行PCR反應液的配制和加樣,本區主要設備有冰箱、掌上離心機、移液槍等,主要試劑耗材包括PCR反應管、PCR熒光檢測試劑盒、PCR管板架、75%酒精棉球等。

                  PCR擴增區:PCR儀上機檢測。本區主要設備有電腦、熒光PCR檢測儀等。

                  以上儀器、試劑和耗材可在本公司一站式配齊,無需額外購買。

                   

                  13.PCR實驗室常用的消毒劑是那種?

                  答:PCR實驗過程要認真細心操作,避免動作幅度過大,引起核酸形成氣溶膠污染實驗室。每次實驗完畢后用10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器,及時清理實驗產生的生物垃圾,最好無害化處理或者在空曠地方燒毀。

                   

                  14.PCR檢測試劑盒需-20度保存,每次使用前融化,這樣反復凍融會影響檢測結果嗎?

                  答:PCR檢測試劑盒平時要保存在-20度冰箱,用前放在室溫或4度冰箱融化。由于反應液中的酶和熒光物質等對溫度敏感,建議反復使用的次數不能超過5次,最好3次左右用完。

                   

                  15.通常提取試劑盒都在室溫條件下保存,里面的蛋白酶K也放在室溫可以嗎?

                  答:蛋白酶K需按照試劑盒說明書要求保存在2-8度或者-20度,不能跟提取盒的其他試劑一起放在常溫,這樣會大大影響酶的活性。所以建議蛋白酶K應按照說明書要求在低溫條件單獨存放和運輸。

                   

                  豬健康體質檢測類產品問答

                  三、豬健康體質檢測類產品

                  1、牧康靈有個產品叫“寒度檢測試劑盒”,請問怎么理解“寒度”的概念?

                  答:寒度,顧名思義,寒的嚴重程度。寒,其實是一種狀態;度,堵也,界限也。從中醫來講,寒氣被堵在身體內就是“寒”。

                   

                  2、寒度檢測試劑盒對臨床有哪些指導意義?即“寒度”的現代科學含義。

                  第一、提示體內存在毒素蓄積程度:人或動物吃入了食物,經過消化、吸收以及其它系列代謝,代謝產物通過各種途徑(比如呼吸、唾液、尿液、汗液、糞便等)排出體外。但是,總有一些代謝產物會在體內短期存留或長期滯留,這些停留的物質就成為蓄積的毒素。所以,“寒度”越高,機體毒素蓄積的程度(被堵的程度)就越嚴重。

                  第二、提示機體肝、腎功能受損程度:當機體內存在毒素蓄積的時候,肝臟的解毒功能和腎臟的排泄功能受到影響,肝、腎等器官的功能受損就順理成章了。所以,“寒度”越高,肝、腎等功能受損越嚴重。

                  第三、提示免疫功能高低:當肝、腎功能受損失以后,體內毒素蓄積進一步加重,導致機體免疫功能持續下降,免疫抑制開始出現,病原體繼發感染,生產上和臨床上的問題越來越嚴重。所以,“寒度”越高,機體的免疫功能越低下,免疫抑制的程度越深。

                   

                  3、如何解決“寒度”過高的問題?

                  答:以下幾點非常重要:

                  (1)首先,必須減少寒性物質的過量攝取,如蛋白質、礦物質、霉菌毒素、抗生素、維生素B和維生素C,等等。

                  (2)其次,通過營養調控和中藥產品進行保肝和護腎,促進毒素物質的代謝分解和排泄。

                  (3)第三,維持相對較高的環境溫度。當豬群出現“返情”、“流產”、“嘔吐”、“腹瀉”、“淚癍”和“毛孔出血”時,表明機體在“排寒”;當豬群表現為“喜靜不喜動”,互相擠壓一起“抱團取暖”時,表明豬群的“寒度”過高。

                   

                  4、寒度檢測試劑使用時注意什么問題?

                  答:(1)注意唾液采集的時間,在清晨豬未采食之前,也就是控食一晚,檢測結果比較準確;(2)豬發生炎癥反應時,顏色會比較淺。

                   

                  5.寒度和朊度檢測試劑盒有哪兩種檢測形式?

                  答:有通過比色卡肉眼判斷檢測結果的“比色法”和通過唾液檢測儀直接讀取結果的“數值法”。兩種方法檢測原理相同,只是判讀結果的方法不同。

                   

                  6、寒度檢測試劑盒(比色法)的檢測方法和結果判斷標準是什么?

                  答:先加2滴豬唾液,再加18滴寒度試劑盒配套的檢測試劑于同一個比色杯孔,20分鐘后,根據顯色深淺判斷檢測結果,通過與試劑盒中的比色卡對比讀取色度值:色度值≥1.0 時,機體寒度均處于非正常水平,且色度越高寒度越高;也就是只要有顏色出現,均提示機體為非正常水平。

                   

                  7. 寒度檢測試劑盒(數值法)的檢測方法和結果判斷標準是什么?

                  答:先加1滴豬唾液,再加9滴寒度試劑盒配套的檢測試劑于同一個玻璃管中,20分鐘后,將玻璃管放入唾液檢測儀的檢測孔中,開機,根據檢測儀顯示數值判斷檢測結果:儀器數值>0時,機體寒度處于非正常水平,且數值越高寒度越高,也就是只要有顏色出現,均提示機體為非正常水平。

                   

                  8、寒度檢測試劑盒(比色法)的包裝規格是怎樣的?有效期多久?如何保存?

                  答:寒度檢測卡一盒9頭份,有效期6個月,常溫10-30度保存(注意:不可以放置冰箱冷藏或冷凍,否則容易讓顏色衰減)。

                   

                  9、你們的“朊度檢測試劑盒”是用來檢測什么指標,有何指導意義?

                  答:朊度是機體內在抵抗力的重要指標,即營養程度和蛋白水平高低。本試劑盒檢測的豬唾液朊度值越高,代表它的營養狀況越好,機體免疫抵抗力越好,反之則抵抗力較差。用于指導養殖生產中飼料營養的增減。

                   

                  10.朊度檢測試劑盒(比色法)的檢測方法和結果判斷標準是什么?

                  答:先加2滴豬唾液,再加18滴朊度試劑盒配套的檢測試劑于同一個比色杯孔,20分鐘后,根據顯色深淺判斷檢測結果,通過與試劑盒中的比色卡對比讀取色度值:色度值<5.0時,機體朊度處于非正常水平,而色度越高朊度越高,代表機體營養水平和抵抗力越好。

                   

                  11. 朊度檢測試劑盒(比色法)的包裝規格是怎樣的?有效期多久?如何保存?

                  答:朊度檢測試劑盒9頭份/盒,常溫10-30度避光保存,有效期24個月。

                   

                  12. 朊度檢測試劑盒(數值法)的檢測方法和結果判斷標準是什么?

                  答:先加1滴豬唾液,再加9滴朊度試劑盒配套的檢測試劑于同一個玻璃管中,20分鐘后,將玻璃管放入唾液檢測儀的檢測孔中,開機,根據檢測儀顯示數值判斷檢測結果:儀器數值<50時,機體朊度處于非正常水平,而數值越高朊度越高,代表機體營養水平和抵抗力越好。

                  樣本采集類產品問答

                  樣本采集類產品

                  1.血液樣本采集和檢測有什么優缺點?

                  答:非洲豬瘟在我國爆發之前,豬場中最常用病原檢測方法為血液或病料PCR檢測,活體一般采集血液樣本。它的優點是靈敏度高,結果準確,但缺點也非常突出:

                  (1)  采集血液屬于有創檢測。對于活體待檢豬采集血液,會對豬造成很大的應激反應,哺乳期母豬容易造成無奶或者少奶的現場,妊娠期母豬會造成豬的流產;病豬容易加重病情,嚴重會直接導致死亡。

                  (2)  需要專業人員、專業儀器設備。

                  (3)  非瘟疫情下采血極易造成陽性病毒擴散,傳播風險極高。

                  (4)  血液檢測病毒陽性說明病毒已經從局部黏膜進入血液循環了,對于非洲豬瘟來說已經是臨床發病期,會造成病毒擴散和傳播,極其不利于早期監控和精準清除。


                  2.唾液樣本采集有何優缺點?

                  答:唾液樣本采集簡單,對豬零應激,無病毒擴散風險,非常方便和適用于豬病檢測項目的樣本采集。

                  目前該采樣方式在非洲豬瘟的早期監測和及時清除中發揮著極其重要的作用。唯一缺點是樣本病毒含量不高,需配合靈敏準確的試劑盒使用。

                   

                  3.牧康靈的唾液采集包的包裝規格及組成有哪些?

                  答:唾液采集包30份/盒,盒子里包含唾液采集袋、含唾液保護液的唾液收集瓶和密封袋。

                   

                  4.什么時候采集唾液檢測最準確?

                  答:采集唾液的最佳時間是前晚停料不停水,控食過夜,第二天凌晨喂料前采集唾液。

                   

                  5.唾液采集包如何使用?

                  答:將唾液采集袋懸掛在豬欄上,高度大致與豬頭平齊;讓豬只自由咀嚼采集袋,大約3分鐘以上收集唾液;取下唾液采集袋,放入密封袋中;將密封袋唾液寄出至含有唾液保護液的收集瓶中待用。

                  6.唾液保護液有什么功能,與唾液樣本混合后可保存多久?

                  答:唾液保護液的作用有三:

                  1) 保護唾液中病毒核酸不被降解,解決唾液中病毒半衰期短的問題。唾液中的病毒半衰期長短不一,長者 2~3 天,短者 1~2 小時不等。

                  2) 添加唾液保護液后,唾液可以短期冷藏、長期冷凍保存;

                  3) 提高非洲豬瘟病毒感染初期的檢出率。

                  唾液采集后,擠出的唾液樣本量與唾液保護液約1:1混合即可。短期內做檢測,可以放置冰箱冷藏保存(15天內),如果要長期保存唾液樣本,需要冷凍保存數月至數年。

                   

                  7.如果豬生病嚴重、精神沉郁不愿咀嚼唾液采集包,怎么采集其唾液樣本?

                  二是采樣棉采樣,這種方法適用于病豬口干,不愿咀嚼的情況,需人為將采樣棉棒伸至豬口腔咀嚼,然后收集唾液,采樣量略有減少,但也能滿足檢測需求。

                  抗原快速檢測卡類產品問答

                  抗原快速檢測卡類產品問答

                   

                  1.牧康靈抗原快速檢測卡和PCR檢測產品原理有什么區別?

                  答:(1)PCR方法是分子水平的診斷,檢測的是病毒核酸,代表樣本中該病毒的存在,可用于活豬和病死豬的實驗室確診檢測。因為其高靈敏度,低含量的病原就可以被檢測出來陽性。(2)牧康靈抗原快速檢測卡是蛋白水平的診斷,是免疫層析原理,檢測的是抗原,我們專利技術就是定位在臨床上豬是否發病這個層面,根據這一定位而進行產品開發的。

                   

                  2.牧康靈抗原快速檢測卡跟市面上的抗體檢測卡一樣嗎?

                  答:我們的檢測卡是檢測抗原的,不同于市面上做抗體檢測的產品。而且我們的樣本主要是采用唾液和糞便,市面上的抗體檢測樣本是血液。

                   

                  3.你們抗原檢測卡產品,現在能檢測哪幾種???

                  答:公司目前有8款病毒性檢測產品:藍耳病毒抗原唾液現場診斷試劑盒、豬瘟病毒抗原唾液現場診斷試劑盒、圓環2病毒抗原唾液現場診斷試劑盒、偽狂犬病毒抗原唾液現場診斷試劑盒、口蹄疫病毒抗原唾液現場診斷試劑盒、流行性腹瀉病毒抗原糞便現場診斷試劑盒、傳染性胃腸炎病毒抗原糞便現場診斷試劑盒和輪狀病毒抗原糞便現場診斷試劑盒。

                   

                  4、你們抗原檢測產品除了可以檢測唾液,還能檢什么樣本?能檢血液和組織病料和精液嗎?

                  答:a.我們的樣本,除了唾液,還可以檢測糞便、水泡液和鼻腔液。如口蹄疫病毒感染,有水泡癥狀出現時,可以直接檢測水泡液,以區分臨床上有水泡癥狀的其它疾??;另外,傳染性胃腸炎和流行性腹瀉,可以直接檢測糞便;根據臨床癥狀懷疑藍耳病時,如果豬只已經臥地不動取樣方便時,可以檢測鼻腔液,藍耳病毒鼻腔液的病毒含量還要高于唾液。

                  b. 我們公司主要做無創檢測產品,故血液不是我們產品檢測的對象,不用來檢測血液。我們未進行用血液樣本檢測的研究和對比數據,用牧康靈檢測卡檢測血液樣本結果不可信。

                  c. 目前產品未做過精液相關對比研究,所以用牧康靈檢測卡檢測精液結果不可信。

                   

                  5、你們的抗原檢測產品能區分野毒和疫苗毒嗎?

                  答:(1)在實驗室層面是不能區分野毒和疫苗毒的;

                  (2)在臨床上可以區分野毒和疫苗毒。接種疫苗后,機體發生免疫應答,產生抗體以中和疫苗毒,7-10天后疫苗毒基本不再向外排毒或者排毒量很低,此時若在唾液或者糞便中檢測出來的陽性結果即可判斷為野毒,而非疫苗毒!

                   

                  6、牧康靈抗原檢測卡使用還需要配合其它設備嗎?

                  答:不需要?!盁o創簡便、現場快速、正確診斷”是我們產品的最大特點和優勢,只需要牧康靈檢測試劑盒就可以了,不需要再額外使用其它工具。

                   

                  7、牧康靈抗原檢測卡準確率怎么樣?有沒有PCR準確?

                  答:單從靈敏度的角度來講,PCR方法靈敏度較高,如果要做豬群的凈化或者種豬入欄篩查,建議使用PCR檢測方法;但是二者的臨床功能定位不同,我們給豬場的結論是“正確”的方向,而不是“準確”的數值,如果要在臨床上判斷豬發病情況,建議使用牧康靈檢測卡。臨床發病豬樣本在檢測限基礎上,準確率可達98%以上。

                   

                  8、牧康靈抗原檢測卡有何臨床指導意義?

                  答:牧康靈抗原檢測卡告訴給豬場是一個“正確”的方向:

                  有沒有得某種???②該不該用苗、用藥?或采取保健措施?

                  有病就針對該種病進行緊急接種或者采取治療保健措施,減少豬死亡或發病的經濟損失;沒該種病就不要針對該種病進行治療,減少由于誤診造成的浪費。臨床上其它方法,或許會告訴豬場一個“準確”的數值,但是“準確”不等于“正確”,因為臨床上“病原存在”不等于“發病”,所以我們老百姓總是花了很多不該花的錢,現在一定要有正確的選擇:不該花的錢不花,不該有的損失不要有!只有方向正確了,后面的選擇才是正確的!而我們牧康靈檢測產品就是解決老百姓這一類問題的,最終的目的就是提高豬場的經濟效益。

                   

                  9、牧康靈抗原檢測卡有哪些優勢?

                  答:(1)樣本是無創樣本:

                  牧康靈檢測卡:用唾液或者糞便作為檢測樣本,屬于“無創”樣本;即在取樣的過程中,不會對豬造成任何傷害,豬沒有任何應激反應;

                  (2)操作簡單易行:

                  牧康靈檢測卡:屬于豬場現場診斷方法,不需要專業人員,不需要配備專業儀器設備,人人都可以操作,操作非常簡單;

                  (3)出結果的時間非??欤耗量奠`方法出結果時間:現場10-30分鐘,從操作取樣開始至出結果時間非???。

                  28、抗原診斷卡使用有效期是多少?需要放在冰箱里面保存嗎?

                  答:有效期兩年。常溫干燥處放置即可,不需要放在冰箱保存。

                   

                  10、檢測唾液樣本的抗原診斷卡可以隨時在豬場檢測豬唾液嗎?

                  答:使用時要注意檢測時間,在豬進食后至少半小時后進行,主要是為了避免食物殘渣阻塞采集頭,從而影響上樣。

                   

                  11、在使用過程中,牧康靈各種抗原診斷試劑盒配的展開劑能通用嗎?

                  答:不能通用。每種卡配套的展開劑都不相同,展開劑瓶上都有標注產品的英文縮寫名稱,在使用的過程中務必配套使用。

                   

                  12、牧康靈抗原檢測卡一個可以測幾頭豬?幾個???

                  答:我們的檢測卡一支只能檢測一頭豬、一種病原。本產品是一次性使用產品,不可以重復使用。

                   

                  13、抗原檢測卡拆開后,當時沒有使用,過幾天還可以繼續使用嗎?

                  答:不可以。因為檢測卡吸濕性比較強,要在拆開后的一個小時內盡快使用,否則極易吸收空氣中的水分,而導致檢測結果不準確。

                   

                  14、牧康靈抗原檢測卡顏色深淺,能說明病毒含量高低嗎?弱弱的兩個條帶出現算陽性還是陰性?

                  答:我們的抗原檢測卡,是定性檢測產品,不是定量,所以顏色深淺與病毒含量高低無直接對應關系。只要有肉眼可見的兩條條帶顯色,無論顏色深淺,都可判定為陽性,即豬場發病原因或者豬場不穩定因素提示。

                   

                  15、牧康靈抗原檢測卡的展開劑一瓶沒用完,一個月后還可以再用嗎?

                  答:可以的,我們配裝展開劑的滴瓶有兩個蓋子,我們使用時請打開上面的小蓋子,而不是大蓋子,使用后蓋好小蓋子,放置陰涼干燥處不被污染即可!

                   

                  16、藍耳病唾液抗原檢測卡可以區分藍耳的毒株嗎?

                  答:不可以。我們的檢測卡是蛋白水平的檢測,不是分子水平的檢測,所以不能精準判斷是哪個毒株,但是我們的藍耳檢測卡對經典株和高致病性毒株都有效。

                   

                  17、牧康靈口蹄疫病毒唾液抗原檢測卡是針對哪種型的?

                  答:我們的口蹄疫抗原檢測卡針對口蹄疫O型和A型有兩種產品,可以用來區分不同型的口蹄疫感染。

                   

                  18、病毒性腹瀉不需要檢測,一看就知道,檢測的意義在哪?

                  答:病毒性腹瀉有幾種情況:流行性腹瀉、傳染性胃腸炎和輪狀病毒,都有相似的癥狀,根據臨床癥狀,很難確診是哪種病因引起,所以輔助診斷尤為必要。

                   

                  19、豬瘟在唾液中的檢出率高嗎?

                  答:豬瘟在全國的病原檢出率不高,因為疫苗的有效保護,豬瘟苗在國內做的還是非常好的。

                   

                  20、臨床檢測時,有好的檢測方案建議嗎?

                  答:在檢測前,先根據臨床發病癥狀預判篩查待檢病原種類,再進行檢測卡的診斷。

                   

                  21、抗原檢測卡的檢測抽檢比例大概是多少?

                  答: 5頭豬-10%不等。有獸醫臨床經驗的,可以根據臨床表現初步判斷鎖定待檢豬,一般一個單元檢測5頭豬即可代表群體發病情況;對于獸醫臨床經驗不足的,可以擴大檢測范圍,從5頭豬-10%比例不等。

                   

                  22、按指導方案檢出一種病原陽性后,下面還需要再檢測其它病原嗎?

                  答:要根據臨床實際發病情況來確定是否還需繼續做其它病原的檢測。

                   

                  23、病豬用牧康靈8種抗原檢測卡檢完了,沒發現陽性,該怎么辦?

                  答:(1)發病豬本身的發病原因就不在我們7種病原檢測的范圍內;(2)如果挑選的待檢豬有臨床癥狀,而結果陰性,首先考慮操作是否準確;如果操作都正常,還要根據豬的實際發病情況綜合判斷,如果豬的發病已經接近尾聲,自身已經耐過病毒,檢測出陰性也是正常結果;(3)若不放心檢測結果,隔天可以重新測試。

                   

                  24、檢完唾液樣本還要檢血液嗎?

                  答:可以根據客戶自己的需求,如果對檢測結果持懷疑態度,可以用PCR血檢方式重新檢測進行驗證,但是前提是檢測卡出現陽性結果時,復核看是否為假陽,如果是陰性結果,復核也沒有意義。因為如果豬群“穩定”,我們的檢測卡本身就是陰性。

                   

                  25、牧康靈抗原檢測卡在使用時有哪些注意問題?

                  答:(1)對于唾液檢測卡,要在采食后至少半小時采取唾液樣本,以防食物殘渣阻塞采集頭;

                  (2)對于糞便檢測卡,要采取新鮮糞便樣本,在肛周刮取或者豬欄地面采集;

                  (3)產品均為一次性使用產品,一個卡只檢測一個病原,不能重復使用;

                  (4)產品開封后,要在一小時內使用,過后使用會導致檢測結果不可信;

                  (5)產品常溫保存即可,注意夏季車內后備箱溫度過高,不要長時間放置在車后備箱中。

                   

                  26、牧康靈抗原檢測卡結果如何判斷?

                  答:檢測結果非常容易判斷,顯而易見:

                  (1)T線處與C線處各出現一條顯色條帶,不論T線處條帶顏色深淺,均提示陽性;

                  (2)僅C線處出現一條顯色條帶,提示為陰性;

                  (3)C線處未出現顯色條帶,檢測結果無效。

                   

                  27、牧康靈抗原檢測卡C線不出現,一般是什么原因?

                  答:(1)在進食30分鐘內采集唾液,導致食物殘渣阻塞采集頭,不能正常上樣;

                  (2)唾液粘稠度較高,阻塞采集頭,不能正常上樣;

                  (3)唾液樣本較臟,里面含有大量污染物或其它雜質,導致不能正常上樣;

                  (4)產品破損或超過保質期,致使產品失效;

                  (5)卡本身質量問題(概率低于0.01%)。

                   

                  28、牧康靈抗原檢測卡如果不上樣,有什么好的解決方案嗎?

                  答:(1)對于唾液檢測卡,可以增加展開劑用量,將展開劑重新滴加到采集好的唾液樣本中4-6滴。

                  (2)對于糞便檢測卡,插入到展開劑瓶中3分鐘后仍不上樣,可以取出檢測卡平放,至出現上樣再放入展開劑瓶中即可。

                   

                  29、牧康靈抗原檢測試劑盒一盒多少支?

                  答:產品分唾液和糞便檢測卡兩類,唾液的2頭份/小盒,12頭份/中盒,所以唾液檢測卡一中盒24頭份;糞便檢測卡沒有最小包裝,30頭份/盒(1頭份即一支)。

                   

                  30、牧康靈抗原檢測卡試劑盒一件多少支?

                  答:唾液和糞便檢測卡都是16(中)盒/件,所以,唾液檢測卡是384頭份/件;糞便檢測卡是480頭份/件。

                   

                  31、牧康靈抗原檢測試劑盒保質期多長?

                  答:不同抗原產品有效期有所不同,使用有效期為1-2年。

                   

                  32、產品可以退換嗎?

                  答:如果屬于產品質量問題可以退換,如果是因為客戶自身原因導致滯銷,則不予退換。

                   

                  33、產品打開內包裝多久還能使用?

                  答:打開后,在一小時內盡快使用。

                   

                  34、牧康靈抗原檢測卡沒有出現 C線可以退換嗎?

                  答:沒有出現C線的原因有很多,如果屬于產品質量問題,可以在購買處進行退換。

                   

                  35、牧康靈抗原檢測卡可以檢測細菌嗎?

                  答:目前的8款產品都是針對病毒性疾病開發,還不能檢測細菌,后期會陸續推出。

                   

                  36、牧康靈抗原檢測卡有時候 10分鐘就紅線,有時候 1個小時都沒紅線怎么辦?

                  答:出現紅色條帶時間的早晚,跟樣本的稀稠程度有關,樣本越稀薄清亮,顯色越快。如果半小時還沒有出結果,就要重新進行檢測了,可以通過多滴加展開劑的方法避免由于樣本過于粘稠而導致的上樣不暢。另外還要注意,檢測時間要在豬進食后半小時進行,以避免食物殘渣阻塞采集頭而導致上樣不正常。

                   

                  37、牧康靈抗原檢測卡怎么采集唾液檢測?

                  答:如果是抗原檢測卡采集方法都相同,將采集頭前端放置口中,讓豬自由咀嚼,直至采集頭濕潤為標準。如果是唾液采集包,可以將唾液采集袋吊在豬欄上,高度大概與豬頭平齊,讓豬自由咀嚼;或者用止血鉗夾住唾液采集袋,放置豬口中咀嚼,至唾液量足夠。

                   

                  38、病情嚴重的豬不咬采集頭或者采集包怎么辦?

                  答:我們可以主動將檢測卡的采集頭放入豬口中刮取唾液。

                   

                  39、有樣品給我試用嗎?

                  答:沒有免費試用樣品,可以折扣優惠價格提供試用產品。

                   

                  40、抗原檢測卡用唾液檢的有血檢的準嗎?

                  答:是的,唾液的組分與血液具有同源性,能夠對機體狀況變化做出及時反映,唾液中不但儲存了大量口腔以及身體其它部位感染微生物和病毒的信息,其本身也是藍耳、偽狂犬、豬瘟、豬圓環等多種疫病的主要排毒途徑之一。完全可以代替血液作為樣本進行臨床病原檢測,或抗體檢測,也就是能用血液進行檢測的,完全可以用唾液進行檢測。

                   

                  41、病豬臨床癥狀很明顯,還有必要檢嗎?

                  答:有必要,因為現在臨床上發病,病癥雖然明顯,但是并沒有某種疾病的典型癥狀,很多病癥非常相似,所以僅通過臨床癥狀,很難確診到底是什么病原引起豬群發病,因此還是非常有必要用牧康靈檢測卡進行輔助診斷。

                   

                  42、公司如何保證產品的質量穩定?

                  答:產品質量無疑是企業的生命線,所以公司必然會注重產品的質量及穩定性,我們有自己的研發、生產和質控中心,從產品的研發、生產到包裝的整個過程都有自己的內控標準和質量控制,可以保證給到客戶手里的產品都是質量穩定的產品。

                   

                  43、能否有技術專家幫助開發規模豬場用戶?

                  答:有。我們可以提供技術支持。

                   

                  44、牧康靈系列產品檢測為陽性,有好的治療保健方案嗎?

                  答:我們會有建議方案,但是具體的治療保健方案要由當地技術人員或者獸醫根據臨床癥狀做最終判斷,我們公司的產品主要以做檢測為主,是臨床很好的輔助診斷工具。

                   

                  45、確定經銷合作后,貴公司有人幫我跟進嗎?

                  答:有。如果是技術問題,都可以咨詢公司技術服務老師;如果是業務上的問題,我們也會有專業招商人員進行跟蹤服務。

                   

                  46、公司能否作會議營銷?

                  答:可以,只要市場資源滿足,完全可以做會議營銷。

                   

                  47、以一個經產母豬一萬頭的縣城為例,牧康靈系列產品有多大的市場容量?

                  答:市場容量可以從三個方面來計算:

                  (1)臨床疑似病例,數量不確定;

                  (2)日常監測:a/ 母豬10000頭,按10%比例,一年檢測4次,按平均檢測3種病原計算,一年即是:1000*4*3=12000頭份

                  b/ 存欄按10萬頭計算:檢測比例按1%計算,一年檢4次,按平均檢測三種病原計算,一年即是:1000*4*3=12000頭份

                  合計檢測:24000頭份

                  市場容量估算:60*24000元=144萬元

                   

                  48、你們檢測到的窗口期是怎么設定?

                  答:窗口期一般是用于檢測抗體設定的,即注射疫苗之后,機體產生抗體的這段時間,我們的產品是檢測抗原的,所以對于我們的產品不涉及窗口期的設定。

                   

                  49、你們的抗原檢測試劑盒適合做監測嗎?

                  答:適合,根據豬場實際情況做監測方案。

                   

                  50、產房乳仔豬能做檢測嗎?

                  答:無論哪個階段的豬,都可以做檢測。

                   

                  51、結果判讀時間一定要20分鐘嗎?

                  答:不一定,結果判讀的時間跟臨床樣本的稀稠度有很大關系,有的樣本清亮稀薄,最快10分鐘就可以出結果;有的樣本比較粘稠,出結果就會慢一些,但是一般半個小時左右都可以進行結果判讀,最長一小時內的結果在可信范圍內,超過一小時的判讀結果不準確。

                   

                  52、你能到豬場親自教一下整個檢測流程嗎?

                  答:不需要到豬場,我們有拍攝好的視頻,都是在豬場實際場景完成,根據視頻可以很好的學習,看了視頻您就會發現,實際操作非常簡單,很容易學會。

                   

                  53、唾液中的病毒量有血液高嗎?

                  答:不能一概而論,每種病毒在血液和唾液中的排毒量都不同,有的唾液中病毒的含量就會高于血液很多倍,比如圓環2病毒,病毒含量是血液的3倍還多。

                   

                  54、什么是抗原?

                  答:凡是能夠刺激機體產生抗體和效應性淋巴細胞并能與之結合,引起特異性免疫反應的物質,稱為抗原。

                   

                  55、病原檢測的意義?

                  答:通過病原檢測,可以直接判斷豬群帶毒情況。其中,牧康靈診斷卡直接檢測抗原,可以直接判斷豬發病病因或者造成豬群不穩定的因素。

                   

                  56、什么是抗體?

                  答:動物機體受到抗原物質刺激后,由B淋巴細胞轉化為漿細胞產生的,能與相應抗原發生特異性結合反應的免疫球蛋白,這類免疫球蛋白稱為抗體(Ab)。

                   

                  57、抗體檢測的意義?

                  答:抗體檢測,主要是看豬群在接種疫苗后的抗體水平如何,即可以直接判斷豬群整體的免疫應答能力,主要通過豬群整體的離散度高低來進行判斷;抗體檢測還可以間接判斷豬群是否有野毒感染。

                   

                  58、病毒的傳播途徑有什么?

                  答:病毒由傳染源排出后,經一定的方式再侵入其它易感動物所經歷的路徑稱為傳播途徑。根據傳播途徑的性質或病原體所經歷的先后路徑,可將其分為兩類或兩個階段。一類即第一個階段是病原體從傳染源排出后到剛一接觸被感染動物的這段路徑,主要包括外界自然環境中的各種媒介,如空氣、水源、土壤、飼料、醫療制劑、精液、卵胚、用具(包括醫療器械)、運輸工具、節肢動物、野生動物(包括鳥類)、非本種動物和人類等;另一類即第二階段是病原體從接觸被感染動物到侵入動物體內器官組織的這段路徑,主要包括呼吸道、消化道、泌尿生殖道、皮膚粘膜創傷(包括自然創傷和醫療性創傷等)和眼結膜等。

                   

                  59、病毒在機體內的發展過程是怎樣的?

                  答:簡單地說,病毒進入細胞,DNA轉錄合成RNA、RNA翻譯合成蛋白質外殼或RNA直接翻譯成蛋白質外殼,病毒數量增加,宿主細胞裂解,病毒釋放。

                  病毒自我復制過程:(1) 病毒體附著到宿主細胞表面并通過胞吞進入細胞;(2) 衣殼分解后,病毒核糖核蛋白轉運入核;(3) 病毒基因組轉錄; 病毒基因組復制;(4)新合成的病毒mRNA出核并完成翻譯;(5) 合成的核蛋白入核與新復制的核酸結合;合成的病毒表面蛋白進入高爾基體完成翻譯后修飾并轉運上膜;(6) 新形成的核衣殼進入細胞質并與插有病毒表面蛋白的細胞膜結合;(7) 新生成的病毒體通過出泡方式離開宿主細胞。

                   

                  60、什么是傳染源?

                  答:傳染源,亦稱傳染來源,是指有某種病原體在其中寄居、生長、繁殖,并能排出體外的活的動物機體。具體說傳染源就是受感染的動物,包括患病動物和帶菌(毒)動物。

                   

                  61、什么是無創檢測,有什么取樣方式?

                  答:顧名思義,“無創”檢測,即取樣時不會對機體造成創傷或創口,讓機體不會產生任何應激反應,此方法可以很好的提高動物福利!

                  無創檢測樣本可以取唾液、糞便、鼻腔液、尿液、精液、乳汁等外周體液。

                   

                  62、什么是有創檢測,有什么取樣方式?

                  答:有創檢測,即取樣時會對機體造成一定程度的損傷或傷害,如取血液、組織病料等,均需借助外界醫療器械植入機體內。

                   

                  63、無創檢測和有創檢測各有什么優勢和缺點?

                  答:無創檢測優勢和特點:取樣操作簡便,省時省力省人工,而且不會對機體造成很大的應激反應。無創檢測將是發展的必然趨勢。

                  有創檢測,如血液檢測的優勢和特點:應用比較廣泛,檢測范圍比較寬泛。

                  樣本“混檢”的危害

                  在樣本檢測工作中,為了迎合用戶降低檢測成本的需求,很多試劑公司推薦一種方案稱為“混檢”:即將兩個或以上的樣本混合檢測,一旦出現陽性結果,則再次分檢,找出陽性樣本。這種檢測方法,對于檢測靶標數量較高的樣本成功率較高,但對于靶標數量較低的樣本漏檢率高,且危害極大。

                  下面以非洲豬瘟的定點清除(拔牙)中廣泛使用的“混檢”方法做簡單分析。

                  假定商品試劑盒的檢測敏感性極高,在臨床上將5份樣本混合檢測,出現陰性結果,則可以假定上述5份樣本均為陰性。

                  若一旦出現陽性結果,則需進行分檢,會出現至少1份,最多5份為陽性的結果。在這種情況下,對陽性結果的豬或豬群進行定點清理(單元格清理)。這是最為理想的狀態。

                   

                  但是,如果出現取樣不均勻;或者樣本沒有進行充分保護,分檢時出現靶標物降解以及提取試劑盒和擴增試劑盒的敏感性不高等因素,則有可能出現“混檢”時陽性,分檢時陰性的結果。這樣的情況較多見且大大困擾技術人員,生產管理者也無從取舍,難以決斷。

                  生產實際中最為可怕的情況是第四種,即“混檢”陰性,若分檢則出現陽性(實際上并沒有人這么去做)。因為在實際檢測工作中,一旦出現“混檢”陰性的結果,則皆大歡喜,不再跟蹤。這樣的假陰性結果危害極大,會導致定點清除工作的失敗。

                  綜上所述,在非洲豬瘟的定點清除工作中,不推薦“混檢”方案的實施,盡量避免樣本之間的相互干擾,對種豬群實施單檢(即逐頭檢測)策略。

                  (文 樊福好)

                  從新冠肺炎假陰性,看非瘟檢測的本質


                  《農財寶典》新牧網 鄧曉祥

                  可能有認真關注疫情的朋友,會關注到近期新冠肺炎診斷中經常出現“假陰性”的情況;而中國工程院王辰院士在回答白巖松的提問時明確表示:“核酸對于已確診的病人陽性率也只在30%-50%之間”。這讓許多養殖戶也聯想到了我們非瘟病毒檢測經常出現的假陰性,導致許多豬場復養失敗。


                  確診的檢測陽性率低,主要原因何在?


                  那是什么原因導致假陰性呢?其實,一般的檢測試劑盒用的應該是pcr擴增原理,就是把原來的rna病毒逆轉錄成dna鏈以后,再循環擴增,最后檢測。

                  循環擴增的循環數應該是按標準操作流程固定的,初始的底物非常少的時候,循環擴增以后的dna可能就達不到檢測閾值,就會可能造成假陰性。

                  借鑒我們養殖行業的非瘟檢測,也解釋了為什么我們許多豬場非瘟檢測正常,復養后又“挨”非瘟的一個重要原因。

                  因此,檢測非瘟,不但要求操作人員技術嫻熟,操作規范,還要求檢測裝備能很好地獲得和保護提取的環境樣本。

                  非洲豬瘟肆虐中國一年多,時至今日依然難以凈化。養殖戶不敢復養,無非是安全復產的問題沒解決。除了生物安全本身,非瘟檢測也是擺在豬場老板面前最開始的難題。簡單說就是:1、復產前如何檢測豬場是否有非瘟病毒,2、復養后如何監控自己豬場日常疫情情況。


                  那具體如何保證檢測的準確度呢?廣東愛蘇生物科技有限公司市場總監劉芮祎給出了自己的建議:

                  一、 樣本采集后,要立即加入到“樣本保護液”中,“樣本保護”主要是防止樣本在采集、運輸和保存、待檢過程中發生質量改變,避免檢測“標的”的損耗甚至消失,如樣本的腐敗、病原體的減少、核酸的降解、抗體的衰減等等。在非洲豬瘟的檢測過程中,這一問題就非常明顯,給行業帶來很多困擾。樣本經過保護以后,就避免了此類問題的發生?!皹颖颈Wo”應該成為行業檢測的習慣!


                  二、 目前市面上市的多數核酸提取試劑盒都是針對血液和組織樣去開發,而對于像唾液或者環境這種病毒量較低的樣本核酸提取,就顯得力不從心。因為血液、唾液、環境樣本中的干擾物質不同,用通用的核酸提取試劑盒來提取唾液或者環境這種低病毒量的樣本就不太科學。應該根據不同的樣本,用專業的提取試劑盒效果更準確。


                  三、 通過培訓,提高檢測人員的專業能力,正確判讀檢測結果。

                  復養成功率普遍低于50%,7成豬場在較高風險區。


                  去年新牧網調研了全國各地249家豬場的風險指數,數據表明,接近17.5%的豬場處于橙色預警高風險等級,還有51.4%的豬場處于黃色預警較高風險等級,只有31%的豬場非瘟風險等級較低。


                  那么,當前復產成功率如何呢?2020年1月下旬,《農財寶典》新牧網記者通過采訪各地金牌經銷商,以母豬存欄(含三元母豬等)為代表,反饋各地復產情況。數據表明,養戶在掌握相對有效的防控方案后,復養積極性均有所提高,行動也快,當地母豬存欄回升也快。四川、重慶規模豬場的母豬存欄恢復至80%,以及貴州的母豬存欄恢復至65%均說明集團養豬公司對產能恢復起著大作用。但值得注意的是,各地中小散戶多在觀望,大集團復養行動迅速。


                  保護好非瘟檢測樣本是關鍵!


                  環境中的污染載毒量成為未來豬場復產的關鍵風險因素。這也是為什么許多豬場復產前要做檢測、復產后定時監測的重要原因。集團豬場在非瘟檢測等生物安全上有較規范的操作體系,且規模效應使得其上量也快;貴州等地也得利于地理優勢 ,環境病毒載量較低,復養成功率也較高。這是值得復養豬場學習的經驗。


                  如今豬價依舊高企,非瘟疫情雖然趨于常態化,但防控形勢依舊嚴峻,做好生物安全仍是當前唯一有效手段。廣東愛蘇生物科技有限公司總經理賀南航表示,當前豬價較為理想,若豬場非瘟檢測防控得當,并成功出欄,基本可以不用考慮檢測產品投入產出比的問題,關鍵是如何保證試劑盒更準確。而準確與否,不但是指檢測設備本身,還包括了對標本采集后配套的保護力度、送檢的速度。新冠肺炎診療方案第六版專門說明的“標本采集后盡快送檢”,也正是這個道理,這是值得我們復養的豬場老板借鑒的寶貴經驗與教訓。


                  核酸提取檢測方法靠不靠譜?


                  新冠肺炎出現假陰性,有人可能會質疑是不是因為核酸檢測方法本身不行?比如在準確度上本身就比其它的差?


                  其實不然,因為只有核酸檢測才是從基因層面進行的確診。采集并提取環境樣本,不但涉及樣本保護,也需要提高試劑盒的提取效率。

                  劉芮袆表示,樣本保護好了,如果提取試劑盒效率低,沒有足夠有效的核酸提取出來,檢測再靈敏,結果也不一定準確!如果是要提取環境的樣本,包括豬舍、過道、出豬臺、車輛、人員衣物及飼料和水源等,可使用環境專用提取試劑盒,不但能提高準確度,還能避免使用血液和組織樣導致的傳染風險;另外,環境監測有其適時性,比如場里剛來過一輛飼料車或者拉豬車,要馬上即時檢測,監測環境中有沒有帶毒,這個時候也可以不需要給豬抽血,比較符合豬場的實際生產防疫情況。通過環境監測,還可以有效評判豬場的消毒措施是否做到“合理有效”,即不過度消毒,也不要遺漏任何一個環節!

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